• Schnelle DNA-Bibliotheks-Vorbereitungs-Ausrüstung V2 K001S-A, K001S-B
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Schnelle DNA-Bibliotheks-Vorbereitungs-Ausrüstung V2 K001S-A, K001S-B

Schnelle DNA-Bibliotheks-Vorbereitungs-Ausrüstung V2 K001S-A, K001S-B

Produktdetails:

Herkunftsort: China
Markenname: GDSBio
Zertifizierung: ISO9001, ISO13485
Modellnummer: K001S-A, K001S-B

Zahlung und Versand AGB:

Min Bestellmenge: 1 Ausrüstung
Verpackung Informationen: Päckchen oder Masse verteilen sich oder Soem
Lieferzeit: 8 Arbeitstage
Zahlungsbedingungen: L/C, D/A, D/P, T/T, Western Union, MoneyGram
Versorgungsmaterial-Fähigkeit: 1000 Ausrüstungen pro Tag
Bestpreis Kontakt

Detailinformationen

Katze. Nein.: K001S-A, K001S-B Spezifikation: Rxns K001S-A/24; Rxns K001S-B/96; Beispielsack 6 rxns
Auftritt: Komplett, kein Schaden Auf Lager: ja
Büchereiähnlich: DNA Der Reihe nach ordnen der Plattform: Illumina
Logo Printing: Mit Logo Printing Transportverpackung: Verpackung
Produktionskapazität: 1000 Ausrüstungen pro Tag Lagerbedingungen: -20°C, mit einem Gültigkeitszeitraum von 12 Monaten.
Markieren:

Wegwerfvirus-Prüfröhrchen GDSBio

,

Wegwerfvirus-Prüfröhrchen der Klassen-I

,

100% Nylonvirusprüfröhrchen

Produkt-Beschreibung

Schnelle DNA-Bibliotheks-Vorbereitungs-Ausrüstung V2

[Produkt-Name]

Schnelle DNA-Bibliotheks-Vorbereitungs-Ausrüstung V2

[Katze. Nein/spezielles]

Rxns K001S-A/24; Rxns K001S-B/96; Beispielsack 6 rxns

[Produkt-Beschreibung]

Illumina-hochdurchsatz anstrebend, der Plattform der Reihe nach ordnet, liefert diese Ausrüstung ein bequemes und Universal-DNA-BibliotheksBauvorhaben in einem Rohr. Sie kombiniert Ende Reparatur und Ein-Rückstand in einen Schritt, groß verkürzt die Zeit des Bibliotheksbaus und verringert den Fehler, der durch langwierige Schritte verursacht wird. Die Endenvorbereitung, die Adapterbindung, die Verstärkung und die Reinigung der zersplitterten doppelsträngigen DNA können innerhalb von ungefähr 2 Stunden durchgeführt werden. Nach der Verdünnung der Bibliothek zu einer passenden Konzentration komplette Bibliotheksquantifikation kann durch dsDNA Methode Leuchtstofffärbung (z.B., Thermo Qubit Flex Fluorometer) oder absoluten Quantifikation PCR durchgeführt werden.

[Beispielart]

Anwendung Beispielart Empfohlene Menge
Ganzes Genomder reihe nach ordnen Komplexe Genome der hohen Qualität 50ng-1μg
Zielgefangennahmender reihe nach ordnen des ganzen exome Komplexe Genome der hohen Qualität 10ng-1μg
Zielgefangennahmender reihe nach ordnen des ganzen Genoms FFPE-DNA ≥50ng
Zielgefangennahmender reihe nach ordnen des ganzen Genoms cfDNA/ctDNA ≥100pg
Ganzes Genomder reihe nach ordnen Mikrobengenom 1ng-1μg
Ganzes Genomder reihe nach ordnen (PCR-frei) DNA der hohen Qualität

≥50ng (keine Größenauswahl)

≥200ng (Größenauswahl)

Chip-folgend Chip DNA ≥100pg
Gerichtetes Der Reihe nach ordnen Amplicon ≥100pg

[Lagerbedingung u. Haltbarkeitsdauer]

Alle Reagenzien sollten am -20°C. Bindungs-Puffer gespeichert werden ist normal, damit Kristalle bei niedrigen Temperaturen, es sollten zur Raumtemperatur vor Gebrauch balanciert werden herbeiführen. Das Produkt ist für 12 Monate gültig.

[Komponenten]

Komponente 24 rxns 96 rxns
Enden-Reparatur u. Ein-Rückstand-Enzym-Mischung μl 120 μl 2×240
Enden-Reparatur u. Ein-Rückstand-Puffer μl 240 μl 2×480
Schneller DNA-Ligase μl 120 μl 2×240
Schneller Bindungs-Puffer μl 600 μl 4×600
HIFIbibliothek 2× PCR-Vorlagenmischung μl 600 μl 4×600
Zündkapsel Mix* μl 120 μl 480

* wenn es mehr als eine Probe gibt, wird Zündkapselmischung des Adapters #K002 und #K003 empfohlen. Diese Ausrüstung versieht einen Satz Zündkapseln mit Index.

Anmerkung: empfohlene Auswahlperlen: Perlen #NC1011 GDSPure DNA Auswahl Magbeads oder AMPure XP.

[Anmerkungen]

1. Wir bieten zwei Arten Universaladapterzündkapseln an, die eingestellt werden (GDS-Adapter, #K002 und #K003, separat gekauft), aber Kunden können von anderen Herstellern auch wählen oder ihren eigenen Adapter für das Illumina synthetisieren, das Plattform der Reihe nach ordnet. Zu viel Adapter führt zu die Bildung des Adapterdimers, und unzulänglicher Adapter führt zu niedrigen Bibliotheksertrag. Deshalb bestimmt passende Adapterkonzentration die Konzentration und die Qualität der Bibliothek. Die empfohlenen Adapterkonzentrationen für verschiedene Mengen DNA-Input werden in der folgenden Tabelle gezeigt:

Empfohlene Gebrauchs-Konzentrationen der Tabelle-1 des Adapters

DNA gab ein Empfohlenes Konz. für Adapter Adapter: Einsatz-Mole Ratio* GDS-Adapter-Verdünnungs-Grad
1μg 10μM 10:1 Keine Verdünnung
500ng 10μM 20:1 Keine Verdünnung
250ng 10μM 40:1 Keine Verdünnung
100ng 7.5μM 100:1 3:4
50ng 5μM 200:1 1:2
25ng 2.5μM 200:1 1:4
1ng 1μM 200:1 1:10

* Adapter: EinsatzMolverhältnis bezieht sich das auf Verhältnis der molaren Zahl des Adapters von anderen Quellen zur eingegebenen molaren Zahl DNA, die ungefähr berechnet werden kann, indem man auf die folgende Formel sich bezieht:

Eingegeben DNA Zahl (pmol) ≈Input DNA Masse (ng-)/[Durchschnittslänge DNA-0.66×Input (BP)]

*The Qualität und Konzentration des Adapters groß den Ertrag der Bibliothek, besonders für niedrige Inputbibliotheken beeinflussen. Der Adapter von einer hochwertigen Quelle sollte zu einer passenden Konzentration mit 0.1×TE vor Bindung vorgewählt werden und verdünnt werden. Für unmittelbaren Gebrauch garantieren Sie, dass jeder Beispielzusatz örtlich festgelegten 5 μl ist-, vermeiden Sie Beispielzusatzfehler, und versuchen Sie, wiederholtes Frieren-Tauen zu vermeiden.

2. Das Enzym, das in HIFIbibliothek 2× PCR-Vorlagenmischung benutzt wird, ist eine b-Familie DNA-Polymerase, die 5" - 3" Polymerase und 3" - 5" exonuclease Tätigkeiten hat, aber ermangelt 5" - 3" exonuclease Tätigkeiten. Es hat hohe Wiedergabetreue und Homogenität und starke stützbare Synthesefähigkeit. Strenge Steuerung der Anzahl von Verstärkungszyklen ist für Bibliotheksertrag besonders wichtig. Die folgende Tabelle zeigt die empfohlene Anzahl von Verstärkungszyklen entsprechend verschiedenen Mengen DNA-Input:

Empfohlene Zahl der Tabelle-2 von Verstärkungs-Zyklen entsprechend unterschiedlichem Beispielinput

Eingegebene DNA Empfohlene Zahl von Verstärkungs-Zyklen
Bibliothek 100ng Bibliothek 1μg
1μg 0 2-5
500ng 0 2-5
250ng 1-3 5-7
100ng 2-4 6-8
50ng 4-6 8-10
25ng 5-7 9-12
10ng 7-9 11-13
5ng 9-11 13-14
2.5ng 10-12 14-16
1ng 11-13 15-17

Anmerkung: 1. Die oben genannte Tabelle zeigt die Testergebnisse mit 150bp Standard-DNA, die als nur Referenz ist.

2. Wenn unvollständige Verbindungsstücke benutzt werden, sollte eine Mindestzahl von Zyklen (1-3) verstärkt werden, um eine komplette Bibliothek zu erreichen.

3. Wenn die Qualität der Input DNA schlecht ist oder die Größenauswahl während des Bibliotheksbaus durchgeführt wird, sollte die Anzahl von Verstärkungszyklen passend erhöht werden.

[Standardbibliotheks-Bauprozess]

Enden-Reparatur

Anmerkung: Wenn die zersplitterte DNA μl 45 übersteigt, bevor dieser Schritt oder der Puffer mit dem Endenreparaturpuffer unvereinbar ist, sollte eine magnetische Perlenreinigung zuerst durchgeführt werden.

1. Bereiten Sie die folgende Reaktion in einem 200 μl PCR-Rohr vor:

Reagenzien Volumen
Zersplitterte DNA Variable
Enden-Reparatur u. Ein-Rückstand-Enzym-Mischung μl 5
Enden-Reparatur u. Ein-Rückstand-Puffer μl 10
ddH2 O Zu μl 65

2. Turbulenz leicht und Drehbeschleunigung unten kurz, zum gut zu mischen, kurz zu zentrifugieren und der ganzer Flüssigkeit zur Unterseite des Rohrs zu sammeln.

3. Führen Sie die folgende Reaktion in einem thermischen cycler durch:

Temperatur Zeit
20°C 15min
65°C 15min
4°C

Adapter-Bindung

1. Fahren Sie mit der Bindungsreaktion so bald wie möglich nach Endenvorbereitung fort.

2. Verdünnen Sie den Adapter entsprechend Tabelle 1.

3. Bereiten Sie das folgende Reaktionssystem vor:

Reagenzien Volumen
Endenreparatur und Ein-Rückstandprodukte μl 65
Schneller Bindungs-Puffer μl 25
Schneller DNA-Ligase μl 5
Adapter X μl 5
Summe μl 100

4. Turbulenz leicht und Drehbeschleunigung unten kurz, zum gut zu mischen, kurz zu zentrifugieren und der ganzer Flüssigkeit zur Unterseite des Rohrs zu sammeln.

5. Führen Sie die folgende Reaktion in einem thermischen cycler durch:

Temperatur Zeit
20°C 15min
4°C

Empfohlene Lösung für PCR-Reinigung/Größen-Auswahl (das spezifische magnetische Perlenvolumen sollte entsprechend der tatsächlichen Mustergröße justiert werden)

1. Bereiten Sie 100 μl Bindungsprodukte in ein passendes Zentrifugenrohr vor.

2. Fügen Sie μl 100 von erneut ausgesetzten magnetischen Perlen DNA-Auswahl der Probe hinzu. Leicht Schlag mit einer Pipette für 10mal (oder Turbulenz für 30 s). Brüten Sie Proben für Minute 5 bei Zimmertemperatur aus.

3. Setzen Sie das Rohr auf ein passendes magnetisches Gestell, um die Perlen vom schwimmenden zu trennen. Wenn die Lösung klar ist, sorgfältig entfernen Sie und werfen Sie das schwimmende mit einer Pipette weg (werfen Sie nicht Perlen weg).

4. Fügen Sie μl 200 80% frisch zubereiteten Äthanols dem Rohr während im magnetischen Gestell hinzu. Brüten Sie bei Zimmertemperatur für 30 s und das schwimmende dann sorgfältig zu entfernen und wegzuwerfen aus (stören Sie nicht Perlen).

5. Wiederholen Sie Schritt 4 einmal für insgesamt zwei Wäschen.

Anmerkung: Seien Sie sicher, alle sichtbare Flüssigkeit nach dem zweiten Washington zu entfernen.

6. Lufttrocknen Sie die Perlen, bis die Oberfläche der magnetischen Perlen keinen offensichtlichen Glanz hat, während das Rohr auf dem magnetischen Gestell mit dem offenen Deckel ist.

Anmerkung: Tun Sie nicht overdry die Perlen, diese kann niedrigere Wiederaufnahme von DNA ergeben. Wenn die Perlen beginnen zu knacken, sind sie zu trocken.

7. Entfernen Sie das Rohr vom magnetischen Gestell. Fügen Sie 22 μl Eluierungspuffer (10mM Tris-HCl, pH8.0-8.5) dem Rohr hinzu. Mischen Sie gut, indem Sie auf und ab mindestens 10mal pipettieren, oder auf einem Turbulenzmischer für 30 brüten S. für Minute 3-5 bei Zimmertemperatur aus.

8. Setzen Sie das Rohr auf das magnetische Gestell. Nach Minute 5 (oder, wenn die Lösung klar ist), Übergangs-20 μl schwimmend zu einem neuen Rohr. Die Auswahl wird abgeschlossen und die vorgewählte DNA kann für folgende Experimente benutzt werden oder an -20°C für eine lange Zeit gespeichert werden.

Bibliotheks-Verstärkung

1. Bereiten Sie die folgende Reaktion in einem 200 μl PCR-Rohr vor:

Reagenzien Volumen
Bindungsprodukte nach Reinigungs- oder Größenauswahl μl 20
HIFIbibliothek 2× PCR-Vorlagenmischung μl 25
Zündkapselmischung μl 5
Summe μl 50

2. Turbulenz leicht und Drehbeschleunigung unten kurz, zum gut zu mischen, kurz zu zentrifugieren und der ganzer Flüssigkeit zur Unterseite des Rohrs zu sammeln.

3. Führen Sie die folgende Reaktion in einem thermischen cycler durch:

Temperatur Zeit Zyklus-Zahl
95°C 3min 1
98°C 20sec

 

Ausgewählte passende Zahl von Zyklen entsprechend Tabelle 2

60°C 15sec
72°C 30sec
72°C 5min 1
4°C -

Empfohlene Lösung für PCR-Reinigung/Größen-Auswahl (das spezifische magnetische Perlenvolumen sollte entsprechend der tatsächlichen Mustergröße justiert werden)

1. Bereiten Sie 50 μl Bindungsprodukte in ein passendes Zentrifugenrohr vor.

2. Fügen Sie μl 45 von erneut ausgesetzten magnetischen Perlen DNA-Auswahl der Probe hinzu. Leicht Schlag mit einer Pipette für 10mal (oder Turbulenz für 30 s). Brüten Sie Proben für Minute 5 bei Zimmertemperatur aus.

3. Setzen Sie das Rohr auf ein passendes magnetisches Gestell, um die Perlen vom schwimmenden zu trennen. Wenn die Lösung klar ist, sorgfältig entfernen Sie und werfen Sie das schwimmende mit einer Pipette weg (werfen Sie nicht Perlen weg).

4. Fügen Sie μl 200 80% frisch zubereiteten Äthanols dem Rohr während im magnetischen Gestell hinzu. Brüten Sie bei Zimmertemperatur für 30 s und das schwimmende dann sorgfältig zu entfernen und wegzuwerfen aus (stören Sie nicht Perlen).

5. Wiederholen Sie Schritt 4 einmal für insgesamt zwei Wäschen.

Anmerkung: Seien Sie sicher, alle sichtbare Flüssigkeit nach dem zweiten Washington zu entfernen.

6. Lufttrocknen Sie die Perlen, bis die Oberfläche der magnetischen Perlen keinen offensichtlichen Glanz hat, während das Rohr auf dem magnetischen Gestell mit dem offenen Deckel ist.

Anmerkung: Tun Sie nicht overdry die Perlen, diese kann niedrigere Wiederaufnahme von DNA ergeben. Wenn die Perlen beginnen zu knacken, sind sie zu trocken.

7. Entfernen Sie das Rohr vom magnetischen Gestell. Fügen Sie 22 μl Eluierungspuffer (10mM Tris-HCl, pH8.0-8.5) dem Rohr hinzu. Mischen Sie gut, indem Sie auf und ab mindestens 10mal pipettieren, oder auf einem Turbulenzmischer für 30 brüten S. für Minute 3-5 bei Zimmertemperatur aus.

8. Setzen Sie das Rohr auf das magnetische Gestell. Nach Minute 5 (oder, wenn die Lösung klar ist), Übergangs-20 μl schwimmend zu einem neuen Rohr. Die Auswahl wird abgeschlossen und die vorgewählte DNA kann an 2-8°C für 1-2 Wochen gespeichert werden oder an -20°C für eine lange Zeit gespeichert werden.

[Anhang] empfohlener Entwurf für doppelseitige Auswahl

Wenn doppel-runde Auswahl angefordert wird, stellen wir den folgenden Entwurf zur Verfügung, um das passende magnetische Perlenvolumen entsprechend der erwarteten Bibliotheksgröße vorzuwählen. Die Größenauswahl kann vor Endenreparatur oder nach Verstärkung durchgeführt werden. Zwei oder doppel-rundere Auswahl verringert groß den Bibliotheksertrag.

Füllen Sie das Bibliotheksvolumen in der Tabelle unten zu μl 100. Wählen Sie das Volumen von magnetischen Perlen in zwei Runden entsprechend der erwarteten Bibliotheksgröße vor. Und führen Sie die Auswahlarbeit entsprechend den folgenden Anweisungen durch.

Empfohlene Menge der Tabelle-3 magnetische Perlen für Doppel-runde Auswahl

Erwartete Bibliotheks-Größe 150bp 200bp 250bp 300bp 400bp 500bp 600bp 700bp
Volumen Perlen (μl) Runde 1 100 90 80 70 60 55 50 45
Runde 2 30 20 20 20 20 15 15 15

1. Füllen Sie das Bibliotheksvolumen zum μl 100 in einem Rohr PCR-200μl und als A. Add ein bestimmtes Volumen magnetische Perlen beschriftet entsprechend der Tabelle 3 (Runde 1) zum Schlag Rohr A. Gently mit einer Pipette für 30 S. brüten Proben für Minute 5 bei Zimmertemperatur aus.

2. Setzen Sie das Rohr A auf ein passendes magnetisches Gestell, um die Perlen vom schwimmenden zu trennen. Wenn die Lösung klar ist, entfernen Sie sorgfältig das schwimmende zu einem neuen Rohr und beschriften Sie es als Perlen B. Discard.

3. Fügen Sie ein bestimmtes Volumen magnetische Perlen entsprechend der Tabelle 3 hinzu (Runde 2) zum Schlag Rohr B. Gently mit einer Pipette für 30 S. brüten Proben für Minute 5 bei Zimmertemperatur aus. Setzen Sie das Rohr B auf magnetisches Gestell. Wenn die Lösung klar ist, das schwimmende sorgfältig entfernen und wegwerfen.

4. Fügen Sie μl 200 80% frisch zubereiteten Äthanols dem Rohr B während im magnetischen Gestell hinzu. Brüten Sie bei Zimmertemperatur für 30 s und das schwimmende dann sorgfältig zu entfernen und wegzuwerfen aus (stören Sie nicht Perlen).

5. Wiederholen Sie Schritt 6 einmal für insgesamt zwei Wäschen.

Anmerkung: Seien Sie sicher, alle sichtbare Flüssigkeit nach dem zweiten Washington zu entfernen.

6. Lufttrocknen Sie die Perlen, bis die Oberfläche der magnetischen Perlen keinen offensichtlichen Glanz hat, während das Rohr B auf dem magnetischen Gestell mit dem offenen Deckel ist.

Anmerkung: Tun Sie nicht overdry die Perlen, diese kann niedrigere Wiederaufnahme von DNA ergeben. Wenn die Perlen beginnen zu knacken, sind sie zu trocken.

7. Entfernen Sie das Rohr B vom magnetischen Gestell. Fügen Sie 22 μl Eluierungspuffer dem Rohr hinzu. Mischen Sie gut, indem Sie auf und ab mindestens 10mal pipettieren, oder auf einem Turbulenzmischer für 30 brüten S. für Minute 3-5 bei Zimmertemperatur aus.

Anmerkung: Wenn gerichtete Gefangennahme nicht durchgeführt wird, fügen Sie Eluierungspuffer (10mM Tris-HCl, pH 8.0-8.5) für Eluierung hinzu. Andernfalls sollte entkeimtes Reinstwasser für Eluierung benutzt werden.

  • Platzrohr B auf dem magnetischen Gestell. Übergangs-20 μl schwimmend zu einem neuen Rohr.

 

Für nur Forschungs-Gebrauch

Schnelle DNA-Bibliotheks-Vorbereitungs-Ausrüstung V2 K001S-A, K001S-B 0

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