Goldfunktelegraphie PCR-Rückseite Transkriptase R3001 2000U R3002 10000U

Goldrückseite Transkriptase R3001 (2,000U) R3002 (10,000U)

Goldrückseite Transkriptase

Für nur Forschungsgebrauch

Komponenten

Lagerung

Dieses Reagens sollte an -30~15°C. gehalten werden.

Beschreibung

Goldrückseite Transkriptase ist- eine neue Rückseite Transkriptase, das durch die molekulare in-vitroentwicklung erreicht wird, die auf M-MLV (RNase h) basiert Rückseite Transkriptase. Der erste Strang von cDNA kann Rückseite Transkriptase synthetisiert werden an der Gold37~55°c. hat, erheblich verbesserte Empfindlichkeit, Besonderheit, Wärmebeständigkeit und Halbwertszeit zu fördern, die für Rückübertragung von RNS-Schablonen mit komplexer Sekundärstruktur sehr passend ist. Goldrückseite Transkriptase hat stärkere Polymerisierungs- und Erweiterungsfähigkeit, die für die Synthese des langen cDNA und den Bau des hohen Anteils von cDNA Bibliothek verwendet werden kann in voller Länge.

Einheits-Definition

Poly (Ra)·Oligo (Papierlösekorotron) wurde als die Schablone/die Zündkapsel verwendet. An 37°C für Minute 10, wurde die Menge des Enzyms erfordert, um 1 nmol dTTP als säureunlösliche Substanz hinzuzufügen als 1 Beschäftigungseinheit (U) definiert.

Qualitätskontrolle

Exonuclease-Rückstandentdeckung: Wurden pmol einzel-angeschwemmtes Substrat DNA-200 U von diesem Produkt und 50 an 37°C für 16 h ausgebrütet, und das DNA-Elektrophoreseband änderte nicht nach Denaturierung SEITEN-Elektrophorese.

Entdeckung des Endonucleaserückstandes: 200 U dieses Produktes und 0,3 μg DNA pBR322 wurden an 37°C für 4 h ausgebrütet, und die Elektrophoresebänder der Plasmide wurden nicht durch Agarosegelelektrophorese geändert.

RNaserückstandentdeckung: das Produkt von 200 U und 1 μg 293 Zellen-RNS wurden an 37°C für Minute 30 ausgebrütet, und das Elektrophoreseband von RNS war durch Agarosegelelektrophorese unverändert.

E.coli DNA-Rückstandentdeckung: der Nukleinsäurerest in 60 U wurde durch gDNA-spezifisches TaqMan qPCR Escherichia Coli ermittelt, und der Rückstand von Escherichia- Coligenom war kleiner als 10 Kopien.

Funktionsentdeckung 1: 200 u-Enzym wurde dem Rückübertragungssystem hinzugefügt, wurde 1 μg Helazellengesamt-RNS als Schablone, Oligo (Papierlösekorotron) ₂₃ als Zündkapsel benutzt, und die Reaktion wurde an 50°C für cDNA 45 min.1/10 Produkt wurde genommen für PCR-Verstärkung von VIN-Gen geleitet. Agarosegelelektrophorese mit EB-Beflecken zeigte ein einzelnes 4,6-Kb-Band.

Funktionsentdeckung 2: 200 u-Enzym wurde dem Rückübertragungssystem hinzugefügt, wurde 1 Seitenhelazellengesamt-RNS als Schablone, Oligo (Papierlösekorotron) ₂₃ als Zündkapsel benutzt, und die Reaktion wurde an 50°C für cDNA 30 min.1/10 Produkt wurde genommen für PCR-Verstärkung von GAPDH-Gen geleitet. Agarosegelelektrophorese mit EB-Beflecken zeigte ein einzelnes 550 BP-Band.

Funktionsentdeckung 3: Helazellen mit 500 ng belaufen sich auf RNS als Schablone, Oligo (Papierlösekorotron) ₂₃ Vertikalnavigation als Zündkapsel, Reaktion 50°C für cDNA 45 min.1/10 Produkt wurden genommen für PCR-Verstärkung des Polε-Gens. Agarosegelelektrophorese, befleckender EB, ein einzelnes (Gaschromatographie-reiches) Band 7,1 Kb kann gesehen werden.

Angelegenheiten, die Aufmerksamkeit benötigen

Verhindern Sie RNaseverschmutzung

Halten Sie bitte das Versuchsgebiet sauber. Saubere Handschuhe und Masken sollten während der Operation getragen werden. RNase-frei wird für die zentrifugalen Rohre sichergestellt und pipettiert die Spitzen und andere Verbrauchsmaterialien, die im Experiment benutzt werden.

Zündkapselauswahl

Verfolgen Sie Experiment ist PCR

Wenn die Schablone vom eukaryotic Ursprung ist, ist Oligo Papierlösekorotron im Allgemeinen bevorzugt, zusammengepaßt mit dem 3' Poly ein Endstück von eukaryotic mRNA für maximalen Ertrag cDNA in voller Länge.

Spezifische Zündkapseln des Gens (GSP) haben die höchste Besonderheit. Jedoch in einigen Fällen verwendete der GSP für PCR-Reaktion kann die Synthese des ersten Stranges von cDNA.At nicht effektiv führen dieser Punkt, kann die Rückübertragung unter Verwendung Oligo Papierlösekorotrones oder der gelegentlichen hexamers nochmals gemacht werden.

Gelegentliche hexamers haben die niedrigste Besonderheit und alle RNS, einschließlich mRNA, rRNA, und tRNA, könnte als Schablonen für gelegentliche hexamers benutzt werden. Gelegentliche hexamers können als Zündkapsel verwendet werden, wenn die Zielregion eine komplexe Sekundärstruktur oder einen hohen GASCHROMATOGRAPHIE-Inhalt hat oder wenn die Schablone prokaryotic ist und der Gebrauch Oligo Papierlösekorotrones oder der Gen-spezifischen Zündkapseln (GSP) cDNA Synthese nicht effektiv führen kann.

Verfolgen Sie Experiment ist qPCR

Oligo Papierlösekorotron mischte mit gelegentlichen hexamers ergab die gleiche cDNA Synthese-Leistungsfähigkeit in jeder Region des mRNA und half, die Echtheit und die Wiederholbarkeit der quantitativen Ergebnisse zu verbessern.

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